通常情況下，各種類型的ELISA酶聯免疫吸附測定方法需用（固相包被→添加待測樣品→溫育→清洗→添加酶標物→溫育→清洗→添加底物→溫育→加終止液→比色→判定結論)這些操作順序步驟。中海生物酶聯免疫吸附試驗操作流程較為復雜，操作流程不恰當會產生很大的偏差。操作流程中應特別注意這些五個注意事項要點。

要點⑴伴隨著疾病進展或受別的方面影響，體內某種抗體的含量變化很大，需用對樣品做好預備處理，如適度稀釋血清樣品或離心血脂。在間接法中，適度稀釋樣品也能夠降低非特異性反應。

要點⑵液體進料器通常用以添加樣品。在中海ELISA酶聯免疫測定中，海加樣有四次（加樣品/加酶結合物/加底物/加終止液）。添加樣品時，需要為每個樣品使用一個移液管噴嘴，以防止交叉污染。添加酶結合物及底物和終止液時不用替換吸嘴。

要點⑶在成批人工檢驗檢測時，還應特別注意操作流程時間誤差的影響。樣品添加時長和混合時長的不同，促使抗原抗體反應和酶促反應的時長不一致，對競爭法和定量檢測有很大影響。無意間的特別注意將會造成不正確的結論或不精準的量化分析。

要點⑷洗滌是影響酶聯免疫吸附中海ELISA試驗成功與失敗的重要環節。*終目的是除去未融合的免疫反應物，停止抗原-抗體反應，并除去與反應無關的樣品。反應過程中吸附在固體載體上的成分/游離酶標記和非特異性物質。洗板機可用以洗板或手工洗板。前面一種清洗品質高，各反應孔清洗結論勻稱，批次間差異性小。手工洗版要特別注意操控每個孔的洗版效果，差異性不適合過大。

要點⑸為了更好地精準測定方法結論，中 海應使用酶聯免疫吸附試驗讀數器和微孔板讀數器。酶標儀可重復性能好。比色判讀可以選擇單波長和雙波長。應按照其反應液的不同顏色選擇不同的波長濾光片，反應孔的吸光度值應通過空白孔的零點校準來確定好。